Nyheter

Javascript är för närvarande inaktiverat i din webbläsare.Vissa funktioner på denna webbplats fungerar inte om JavaScript är inaktiverat.
Registrera dig med dina specifika uppgifter och det specifika läkemedlet av intresse, så matchar vi informationen du ger med artiklar i vår omfattande databas och mailar dig en PDF-kopia omedelbart.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Institutionen för infektionssjukdomar, Suzhou University First Affiliated Hospital, Suzhou City, Jiangsu-provinsen, 215000 Tel.tumörer i matsmältningssystemet med en 5-års total överlevnad på 14,1%.Många patienter med HCC diagnostiseras i ett framskridet stadium, så tidig screening är avgörande för att minska dödligheten från HCC.Förutom vanliga detektionsindikatorer som serum alfa-fetoprotein (AFP), linslektin-reaktivt alfa-fetoprotein (AFP-L3) och onormalt protrombin (vitamin K-brist-inducerat protein II, PIVKA-II), vätskebiopsitekniker Det har visat sig vara av diagnostiskt värde vid upptäckt av HCC.Jämfört med invasiva procedurer kan vätskebiopsi upptäcka cirkulerande maligna metaboliter.Vätskebiopsitekniker detekterar cirkulerande tumörceller, cirkulerande tumör-DNA, cirkulerande RNA och exosomer och används för tidig screening, diagnos och prognostisk utvärdering av HCC.Den här artikeln granskar molekylärbiologin och tillämpningen av olika tekniker för vätskebiopsier för att isolera lovande biomarkörer som kan vara genomförbara alternativ för tidig bedömning av HCC för att förbättra tidig screening av högrisk-HCC-grupper.Nyckelord: teknik för vätskebiopsi, hepatocellulärt karcinom, högriskgrupp .
Hepatocellulärt karcinom (HCC) är en vanlig elakartad tumör i matsmältningskanalen, rankad sjätte bland nya fall av maligna tumörer hos både män och kvinnor.1 Över hela världen är levercancer den tredje vanligaste orsaken till cancerdöd efter lung- och kolorektal cancer, och står för 8,3 % av cancerrelaterade dödsfall från alla maligna neoplasmer.1 Prognosen för HCC är nära relaterad till stadiet vid diagnos.De främsta orsakerna till dålig överlevnad vid HCC är intrahepatiska metastaser, portalvenösa tumörtrombi och fjärrmetastaser som förhindrar resektion, och många av dessa egenskaper finns redan hos patienter vid diagnostillfället.
Baserat på riktlinjer för diagnostik och behandling är de viktigaste riskfaktorerna för att utveckla HCC levercirros, kronisk hepatit B-virus (HBV) eller hepatit C-virus (HCV), alkoholisk fettleversjukdom och icke-alkoholisk fettleversjukdom (NAFLD) ).2 Dessutom inkluderar riskfaktorer för HCC aflatoxinförorenat födointag, schistosomiasis, andra orsaker till cirros, en familjehistoria av levercancer, diabetes, fetma, rökning och läkemedelsinducerad leverskada.35- och 45-åriga högriskgrupper bör ha regelbundna läkarkontroller.Tidig screening är en viktig tidig behandlingsstrategi för att förbättra den totala överlevnaden för patienter med HCC.
Biomarkörer som AFP, AFP-L3 och PIVKA-II rekommenderas för tidig screening av HCC3,4.Flytande biopsitekniker har visat lovande resultat vid tidig diagnos och behandlingsutvärdering.5,6 Betydande framsteg har gjorts i HCC-vätskebiopsi, som kan ha högre sensitivitet och specificitet än vanliga serummarkörer som AFP (tabell 1).
AFP är en allmänt använd biomarkör i HCC och är för närvarande den mest detaljerade biomarkören som ofta används för tidig screening, diagnos och utvärdering av sjukdomen.En ihållande förhöjd AFP-nivå anses vara en riskfaktor för progression av HCC.7,8 Detektionshastigheten för små hepatocellulära karcinom (sHCC) ökar med utvecklingen av ultraljud och datortomografi, och AFP har visat sig vara särskilt okänsligt för detektion av hHCC i klinisk praxis.Enligt en retrospektiv multicenterstudie9 fann man AFP-positiv i 46 % (616/1338) av HCC-fallen och 23,4 % (150/641) av sHCC-fallen.Dessutom är AFP-nivåerna förhöjda hos patienter med kronisk leversjukdom och cirros.10 Sålunda har AFP en begränsad screeningseffekt för sHCC.11 Enligt Asia-Pacific Clinical Practice Guidelines for Hepatocellular Carcinoma rekommenderas inte användning av AFP.12 Kliniska bevis tyder på att PIVKA-II är överlägset AFP vid behandling av HCC och att kombinationen av PIVKA-II och AFP har ett högre diagnostiskt värde i HCC.13 Jämfört med vävnadsbiopsi upptäcker vätskebiopsi primärt tumörassocierade metaboliter i kroppsvätskor (blod, saliv, pleuravätska, cerebrospinalvätska eller urin) och är mindre invasiv för vävnader.14 Dessutom kan flytande biopsier återspegla maligna egenskaper som inte finns i primär tumörvävnad.15 Flytande biopsier testas ännu inte i klinisk praxis för alla typer av tumörer, men deras diagnostiska potential vid cancer lockar onkologers uppmärksamhet.16 Vätskebiopsi kan detektera cirkulerande tumörceller (CTC), cirkulerande tumör-DNA (cDNA), cirkulerande fritt RNA (ecRNA) och exosomer.I den här artikeln kommer vi att diskutera egenskaperna, rollen och tillämpningen av olika vätskebiopsitekniker vid tidig screening av högriskgrupper för HCC.
Extracellulärt DNA (cfDNA) i blodprover från friska individer beskrevs första gången 1948 av Mandel et al.17 cfDNA är ett cellfritt DNA-fragment med en längd på cirka 160–180 bp, som huvudsakligen kommer från lymfocyter och myeloidceller.ctDNA är ett specifikt mutant DNA-fragment som frisätts av tumörceller till det perifera blodet, vilket representerar den genomiska informationen från tumörceller efter vissa patofysiologiska processer, inklusive nekros, apoptos och utsöndring.Andelen ctDNA i totalt cfDNA varierar kraftigt med tumörtyp, och cDNA-fragment rapporteras vanligtvis vara mindre än 167 bp långa.18 Underhills studie visade att cfDNA-fragment i allmänhet är kortare än normalt cfDNA.19 Jämfört med friska individer är den totala längden av cfDNA-fragment i blodet hos cancerpatienter kortare, så cfDNA kan användas som en indikator på tidig tumörscreening.Anrikning av vissa undergrupper av cfDNA-fragmentlängder kan förbättra detektionen av cDNA associerat med icke-metastatiska solida tumörer.Studier har visat att ctDNA finns i över 75 % av avancerad cancer i bukspottkörteln, tjocktarmen, urinblåsan, mag-tarmkanalen, levern, äggstockarna, bröstcancer, melanom och huvud- och halscancer.20,21 Mängden ctDNA i blodet beror dock på tumörens placering.22 I en studie av Bettegoud visade sig patienter med kolorektal-, bröst-, lever-, lung- och prostatacancer ha högre nivåer av cDNA i blodet än andra cancerformer.Däremot var cDNA-koncentrationen i blodet lägre hos patienter med oral cancer, pankreascancer, magcancer och gliom.tjugoett
Eftersom ctDNA innehåller samma genetiska mutationer som primära tumörceller, kan cDNA användas för att detektera heterogena tumörspecifika mutationer och epigenetiska förändringar, inklusive metylering, hydroximetylering, enkelnukleotidvariationer och kopieantalvariationer.tjugotre
DNA-metylering är en av de vanligaste epigenetiska förändringarna som resulterar i genrepression.Jämfört med normala celler finns det skillnader i den totala nivån av metylering av tumörcellsgenomet, särskilt i metyleringen av tumörsuppressorgener, som kan detekteras i ett tidigt skede, vilket tyder på att förändringar i DNA-metylering kan vara en indikator på tidig upptäckt av tumörbildning.Tumörsuppressorgener associerade med HCC kan inaktiveras genom promotormetylering, vilket stimulerar tumörbildning.24 DNA-metylering är en idealisk markör för tidig diagnos av tumörer på grund av dess vävnadsspecificitet, detekterbarhet och åldersoberoende.Dessutom är DNA-metylering vanligare jämfört med somatiska mutationer eftersom det finns fler målregioner och flera förändrade CpG-ställen i varje region av målgenomet.25 Förutom flera CpG-ställen har ett stort antal oberoende hypermetylerade loci i ctDNA identifierats i DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 och RGS10.26 Xu et al.Jämförelse av cfDNA-prover från 1098 HCC-patienter och 835 friska kontroller var gener associerade med HCC visade sig starkt korrelera med motsvarande plasma-cDNA-metyleringssignaturer.25 Baserat på laboratorieanalys utvecklades en prediktiv modell innehållande 10 metyleringsmarkörer med sensitivitet och specificitet på 85,7 % respektive 94,3 %, och dessa markörer var starkt korrelerade med tumörmassa, tumörstadium och behandlingssvar.Dessa resultat indikerar att användningen av cDNA-metyleringsmarkörer är mycket lovande vid diagnos, övervakning och prognos av HCC.I en metyleringsmodell bestående av tre avvikande metylerade gener (APC, COX2, RASSF1A) och en miRNA (miR203) presenterad av Lu et al27, var känsligheten och specificiteten hos modell 27 för att diagnostisera HBV-associerad HCC jämförbar.80 %.Dessutom kunde modellen upptäcka 75 % av odiagnostiserade HCC-patienter med en AFP-nivå på 20 ng/ml.Genen för den Ras-associerade domänfamiljen 1A-protein (RASSF1A) är den huvudsakliga repetitiva DNA-sekvensen i det mänskliga genomet.Araujo et al.drog slutsatsen att hypermetylering av RASSF1A-promotorn kan vara en värdefull biomarkör för tidig screening av HCC och ett potentiellt molekylärt mål för epigenetisk terapi.28 I en studie hittades serum RASSF1A-promotorhypermetylering hos 73,3 % av patienterna med HCC.29 Långt interspersed nukleotidelement 1 (LINE-1) är en annan mycket aktiv retrotranspositionsmediator.Hypometylering av LINE-1 hittades i DNA från 66,7 % av HCC-serumproverna och var associerad med tidigt återfall och dålig överlevnad efter radikal resektion.29 Hypermetylering är en vanlig genetisk process som spelar en unik roll i utvecklingen av levercirros och HCC.30 Däremot är hydroximetylering en demetyleringsprocess som inducerar genreaktivering och uttryck, och detektionen av 5-hydroximetylcytosin (5-hmC)-produkten i denna process kan användas för att identifiera en tumör.Metylering och hydroximetylering av cDNA är associerade med tumörbildning och kan bidra till tidig screening av HCC.I en studie av 2554 försökspersoner hittades 31 genomomfattande 5-hmCs i cfDNA-prover, och 32 gener identifierades genom att jämföra 5-hmC-sekvenser i HCC-patienter och högriskgrupper som de med kroniska sjukdomar.Diagnostiska modeller av leversjukdomar.och cirros.Denna modell var överlägsen AFP när det gällde att skilja HCC från icke-tumörvävnad.
Mutationer i kodande regioner kan leda till transkriptionella abnormiteter, vilket kan leda till förändringar i proteinsekvenser och i slutändan cancer.Enkelnukleotidvarianter är viktiga genomiska markörer för tidig tumörscreening på grund av deras höga vävnadspålitlighet och höga tumör- och vävnadsspecificitet.Flera HCC-relaterade studier som använder nästa generations sekvensering (NGS) för exom- och helgenomsekvensering av cancer har identifierat vanliga muterade cellulära gener som TP53 och CTNNB1, såväl som flera inklusive ARID1A, MLL, IRF2.De nya generna, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 och JAK1 visar måttliga mutationshastigheter. Analys av mutantgenfunktioner tyder på att förändringar i kromatinombyggnad, Wnt/β-catenin och JAK/STAT-signaltransduktion, P53-cellcykelvägen, epigenetiska modifierare, oxidativ stressvägar, PI3K/AKT/MTOR-vägen och RAS/RAF/ MAPK-kinasvägen spelar avgörande roller i HCC-onkogenes.32,33 I en studie där tumörassocierade mutationer upptäcktes fann Huang et al att frekvensen av tumörassocierade mutationer beroende av ctDNA var 19,5 %, och specificiteten var 90 % .34 Dessutom var patienter som upplevde vaskulär invasion mer benägna att ha ctDNA-mutationer (P=0,041) och kortare återfallsfri överlevnad (P<0,001). Analys av mutantgenfunktioner tyder på att förändringar i kromatinombyggnad, Wnt/β-catenin och JAK/STAT-signaltransduktion, P53-cellcykelvägen, epigenetiska modifierare, oxidativ stressvägar, PI3K/AKT/MTOR-vägen och RAS/RAF/ MAPK-kinasvägen spelar avgörande roller i HCC-onkogenes.32,33 I en studie där tumörassocierade mutationer upptäcktes fann Huang et al att frekvensen av tumörassocierade mutationer beroende av ctDNA var 19,5 %, och specificiteten var 90 % .34 Dessutom var patienter som upplevde vaskulär invasion mer benägna att ha ctDNA-mutationer (P=0,041) och kortare återfallsfri överlevnad (P<0,001).Analys av mutantgenfunktioner tyder på att förändringar i kromatinremodellering, Wnt/β-catenin och JAK/STAT-signalering, P53-cellcykelväg, epigenetiska modifierare, oxidativ stressvägar, PI3K/AKT/MTOR-väg och RAS/RAF/MAPK-kinasvägar spelar upp en kritisk roll i HCC-tumörbildning.32,33 I en studie som fann tumörassocierade mutationer visade Huang et al.fann att frekvensen av ctDNA-beroende tumörassocierade mutationer var 19,5 % och specificiteten var 90 %..34 крvik .34 Dessutom hade patienter med vaskulär invasion fler cDNA-mutationer (P=0,041) och en kortare sjukdomsfri överlevnad (P<0,001).Funktionell analys av mutantgenerna avslöjade kromatinremodellering, Wnt/β-catenin och JAK/STAT-signalering, P53-cellcykelvägen, epigenetiska modifierare, den oxidativa stressvägen, PI3K/AKT/MTOR-vägen och RAS/RAF/MAPK kinasvägen spelar en avgörande roll i onkogenes av HCC. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中，Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%，特异性为90% .34 此外，经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 I en studie som fann tumörassocierade mutationer, Huang et al.fann att tumörassocierade mutationer var 19,5 % beroende av cDNA med en specificitet på 90 % 34. Dessutom var patienter som hade genomgått vaskulär invasion mer benägna att utveckla cDNA.мутация (P = 0,041) och более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutation (P=0,041) och kortare sjukdomsfri överlevnad (P<0,001).En annan vanlig HCC-drivargen är TP53, som har en mutationsfrekvens på över 30 %.Studier har visat att frekvensen av TP53-mutationer i ctDNA i blod och urin varierar från 5 % till 60 %.35 Johans studie visade att ctDNA-mutationsspektrumet i sen HCC har en liknande mutationshastighet som tidig HCC, inklusive TERT-promotorn (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutationer i AXIN1 ., ARID2, KMT2D och TSC2 (6 % vardera).36 Onkogenen β-catenin (CTNNB1) spelar en viktig roll i Wnt-signalvägen.Transkriptionskoaktivatorn CTNNB1 kan främja genuttryck, vilket kan leda till cellproliferation, hämning av apoptos och angiogenes.CTNNB1 kan också interagera med TERT för att inducera hepatocyttransformation.33 TERT-promotorn är ofta muterad i vissa solida tumörer.Förändringar i TERT, en av de tidigaste genetiska förändringarna i malign transformation av HCC, kan leda till telomerasreaktivering i cirrotiska hepatocyter och kan främja proliferation och förhindra åldrande.Mutationer i 33-37 TERT-promotorn har rapporterats förekomma hos 59-90 % av patienterna med proliferativa leverknölar och tidig HCC och är associerade med överlevnad.38
Kopieringsnummerförändringar (CNA) är en viktig undertyp av somatiska mutationer.Forskning har visat att den utbredda och fokala bördan av CNA är en genomisk signatur som kan förutsäga tumörimmuninfiltration och uteslutning i vissa typer av cancer.39 Aktiv infiltrationssignalering, hög cytolytisk aktivitet, allvarlig inflammation och genetiska markörer associerade med antigenpresentation i HCC.Analys av datamatrisen av enkelnukleotidpolymorfismer i 477 försökspersoner avslöjade en låg belastning på CNS.Däremot visade kromosomalt instabila tumörer med en hög omfattande CNA-belastning tecken på immunavstötning och var associerade med proliferation, DNA-reparation och TP53-dysfunktion.Xu et al.visade att HCC-gruppen hade högre CNA-poäng än gruppen med kronisk leversjukdom.40 Genom att använda hel-genomsekvensering av en enskild cell, visade sig CNA uppträda tidigt i hepatokarcinogenes och förbli relativt stabila under tumörprogression.41 Chung et al.fann att cfDNA-nivåer var signifikant förhöjda hos HCC-patienter och att genomomfattande CNA i cfDNA var en viktig oberoende prognostisk markör hos HCC-patienter som behandlades med sorafenib.42 Patienter med en högre CNA-börda var mer benägna att få sjukdomsprogression och död än de med en lägre CNA-börda.Ollerich et al.fann att kopietalsinstabilitetsindex (CNI) kan användas för att bedöma CNA i cfDNA hos cancerpatienter.De noterade att patienter med avancerad cancer hade signifikant högre CNI-poäng än en kontrollgrupp, som bedömer patientens svar på systemisk kemoterapi och immunterapi.43 Dessa resultat tyder på att CNA som finns i flytande biopsiprover kan fungera som prognostiska indikatorer hos patienter med avancerad cancer.HCC på bakgrund av systemisk terapi.
För närvarande kan metoderna som används för att detektera ctDNA delas in i målinriktade och icke-riktade metoder.Kortfattat är riktade metoder som digital polymeraskedjereaktion (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq och Tam-Seq mycket känsliga för fördefinierade gener.Off-target-metoder som helgenomsekvensering och NGS ger en heltäckande bild av hela det genomiska landskapet.44 Jämfört med målpaneler kan helgenomsekvensering inte bara upptäcka punktmutationer och insättningar, utan även omarrangemang och variationer i antal kopior.prognos, och CTC och cfDNA är bra indikatorer som kan användas för dynamisk övervakning av HCC.45 Dessutom kan cfDNA-analys vara mer användbar för att detektera HCC.Yan et al.visade att cfDNA i plasma hos patienter med HCC var signifikant högre än hos patienter med leverfibros och friska kontroller.Jämfört med AFP förväntas ctDNA vara en bättre screeningmarkör för tidig HCC.46 I en prospektiv studie av 47 flytande biopsier som testade cfDNA och protein i en populationspopulation visade sig de vara effektiva för att skilja patienter med HCC från patienter utan HCC.I en uppföljning av 331 normala och AFP-negativa ultraljudspatienter var sensitiviteten och specificiteten för cfDNA för diagnos av HCC 100 % respektive 94 %, så cDNA kunde detektera HCC hos asymtomatiska HBsAg-seropositiva individer.I Yeo48-studien hittades en hög frekvens (92,5%) av hypermetylering av RASSF1A-promotorn hos patienter med HCC.Dessutom har Xu et al.skapat en diagnostisk modell för att förutsäga HCC med hjälp av en panel av specifika metyleringsmarkörer med en specificitet och sensitivitet på 90,5 % respektive 83,3 %.Panelen gör att patienter med HCC kan särskiljas från patienter med andra leversjukdomar, vilket är bättre än AFP.De fann också att normala kontroller som testade positivt kan ha riskfaktorer för HCC, såsom HBV-infektion eller en historia av alkoholanvändning.25 Vi antar att högriskfaktorer för HCC kan främja hypermetylering av cfDNA, vilket sedan bidrar till utvecklingen av HCC, och därmed kan cfDNA spela en nyckelroll vid screening för högriskgrupper.Cai et al.sammanfatta hela utbudet av ctDNA-mutationer och erbjuda en robust strategi för att bedöma tumörbördan hos patienter.49 Denna strategi kan identifiera tumörbildning en median på 4,6 månader före bildändring och har visat överlägsen diagnostisk prestanda jämfört med serumbiomarkörerna AFP, AFP-L3 och PIVKA-II.Det diagnostiska värdet av cDNA-testning har visats när bildutvärdering inte är tillgänglig, så cDNA-testning är av värde vid diagnos av tidig HCC i högriskgrupper.Nyligen använde forskare NGS-teknologi för att analysera indikatorer för multivariat genetisk variation (inklusive 5-hydroximetylcytosin, 5'-motiv, fragmentering, nukleosomspår, HIFI) i 3204 kliniska prover och cfDNA.50 omvaliderade HIFI-modeller med tre oberoende tåg-, test- och testuppsättningar visade stabil och tillförlitlig diskriminering mellan HCC- och icke-HCC-populationer med 95,79 % och 95,42 % känslighet i HCC-specifika test- respektive testset.Könen var 95,00 % respektive 97,83 %.Det diagnostiska värdet för HIFI-metoden är högre än för AFP när det gäller att skilja HCC från cirros.Dessutom används ctDNA även vid kirurgisk behandling.Atsushi et al.bestämde de preoperativa serumnivåerna av ctDNA hos patienter med HCC och fann att återfallsfrekvensen och den extrahepatiska metastaseringsfrekvensen i den cDNA-positiva gruppen var signifikant högre än i den cDNA-negativa gruppen, och cDNA-nivåerna var signifikant korrelerade.med tumörprogression.51 Eftersom ctDNA är en mycket känslig biomarkör kan HCC förutsäga förmågan hos HCC att invadera kärl.Wang et al.utförde helgenomsekvensering av 46 patienter med HCC, och multivariat analys visade att tröskelvärdet för allelfrekvensen för cDNA-varianten för invasion i mikrokärl är 0,83 %, sensitivitet 89,7 % och specificitet 80,0 %.en oberoende riskfaktor för mikrovaskulär invasion i resektabel HCC, vilket tyder på att cDNA kan hjälpa till att styra optimal behandling.Sammanfattningsvis är ctDNA fullt inblandat i förekomsten och utvecklingen av HCC och kan användas för tidig screening, kirurgisk utvärdering och sjukdomsövervakning.
CTC är maligna celler som härrör från primära tumörer eller metastaser som metastaserar till blodomloppet.Tumörceller utsöndrar matrismetalloproteinaser (MMP), som bryter ner basalmembranet, vilket gör att tumörceller kan komma direkt in i blodet och lymfkärlen.De flesta CTC:er elimineras dock snabbt av anoikis, immunattack eller skjuvstress.53 Den epitelial-mesenkymala övergången (EMT) gör att CTC:er lätt kan isoleras från den primära tumörvävnaden, invadera kapillärer och förvärva signifikant förbättrad överlevnad, metastaser, invasivitet och läkemedelsresistens.Studier har visat att det finns en djupgående heterogenitet mellan de olika tumörcellerna i primära metastaserande tumörer.Således kan CTC-analys leda till en omfattande förståelse av tumörcellernas heterogenitet.54
Specifika markörer för HCC-associerade CTC inkluderar glypican-3 (GPC3), asialoglykoproteinreceptor (ASGPR), epitelcelladhesionsmolekyl (EpCAM) och stamcellsassocierade markörer såsom CD44, CD90, 55 och intercellulär adhesionsmolekyl 1 (ICAM1).) .56 GPC3-markören är ett cellmembranförankrat protein som används kliniskt för patologisk analys och karakterisering av HCC.57 Uttryck av GPC3 är vanligare i HCC-tumörceller med mellanliggande och låg differentiering och främjar extrahepatisk migration;Dessutom indikerar närvaron av GPC3+ CTCs metastaserande HCC.58 ASGPR är ett transmembranprotein som endast uttrycks på ytan av hepatocyter och är starkt uttryckt i väldifferentierat HCC.EpCAM är ett av de mest använda membranassocierade proteinerna för att fånga CTC.EpCAM har identifierats som en ytmarkör för HCC-celler med stamcellsegenskaper,59 vilket korrelerar med olika klinisk-patologiska egenskaper hos HCC, såsom vaskulär invasion, bedömda AFP-nivåer och framskridet stadium av levercancer vid Barcelona Hospital (BCLC).60 CTC EMT-fenotypen är mycket metastaserande.54 EMT-processer i CTC främjar HCC-metastaser.Uttryck av EMT-markörer såsom vimentin, twist, E-box zinkfingerbindning (ZEB) 1, ZEB2, snigel, snigel och E-cadherin har studerats i leverhärledda CTC från HCC-patienter.58 CanPatrol™-systemet utvecklat av Cheng [61] klassificerade CTC i tre fenotypiska undergrupper baserade på övervägande uttryckta markörer: epitelfenotyp (EpCAM, CK8/18/19), mesenkymal fenotyp (vimentin, lindad) och blandad fenotyp.Hos 176 patienter var total CTC överlägsen AFP när det gällde att skilja HCC från benign leversjukdom.AUC-värdena för total CTC, AFP och kombinerad total CTC och AFP var 0,774 (95 % KI, 0,704–0,834), 0,669 (95 % KI, 0,587–0,750) och 0,821 (95 % KI, 0,756–0,856–0,856 ).), respektive.CTC-klassificering baserad på EMT kan förutsäga HCC-diagnos, tidigt återfall, metastaser och kortare total tid.
För närvarande inkluderar metoder för att detektera CSC: er fysikaliska metoder och biologiska metoder.Fysiska metoder, ofta kallade anrikning baserade på biofysikaliska egenskaper, beror huvudsakligen på de fysiska egenskaperna hos CSC, såsom storlek, densitet, laddning, rörlighet och deformerbarhet.Beroende på de fysikaliska egenskaperna finns det olika metoder som filtreringsbaserade system, dielektrofores etc. Den senare, även känd som immunaffinitetsbaserad anrikning, bygger huvudsakligen på antigen-antikroppsbindning eftersom metoden använder antikroppar mot tumörspecifika biomarkörer såsom EpCAM, ASGPR, human epidermal tillväxtfaktorreceptor 2 (HER2), prostataspecifikt antigen (PSA), humant pancytokeratin (P-CK) och karbamoylfosfatsyntas 1 (CPS1).62 En annan typ, kallad no-anrichment-metoden, använder flödescytometri för att skilja CTC från leukocyter baserat på ett högre nukleärt-till-cytoplasmatiskt förhållande och storlek.För närvarande är det enda FDA-godkända testet för detektering av CTC:er Cell-Search™-systemet, som använder EpCAM-cellytmarkören. Kombinerad markörbaserad CTC-detektion skulle dock kunna öka positivitetshastigheten.54 En blandning av antikroppar mot ASGPR och CPS1 uppnådde en CTC-detektionsgrad på 91 % hos HCC-patienter.63 Zhang et al använde ett CTC-Chip med antikroppar mot ASGPR, P -CK och CPS1, och differentierade HCC-patienter från de med benign leversjukdom eller icke-HCC-cancer med en hastighet av 100%.64 En studie av Wang upptäckte EpCAM+ CTC hos 60% av 42 HCC-patienter och fann signifikanta korrelationer mellan båda positiviteten frekvens och antalet CTC med TNM-stadium.65 Guo et al fann att en CTC-deriverad PCR-poäng var förhöjd hos 125/171 (73 %) patienter vars AFP-nivå var <20 ng/ml med en känslighet på 72,5 % och en specificitet på 95,0 %, jämfört med 57,0 % och 90,0 % för AFP vid en cut-off 20 ng/ml.66 Kombinationen av AFP och CTC kan förbättra HCC-detektion.45 Man tror att CTC har en fördel jämfört med AFP vid tidig screening av grupper med hög risk för HCC. Kombinerad markörbaserad CTC-detektion skulle dock kunna öka positivitetshastigheten.54 En blandning av antikroppar mot ASGPR och CPS1 uppnådde en CTC-detektionsgrad på 91 % hos HCC-patienter.63 Zhang et al använde ett CTC-Chip med antikroppar mot ASGPR, P -CK och CPS1, och differentierade HCC-patienter från de med benign leversjukdom eller icke-HCC-cancer med en hastighet av 100%.64 En studie av Wang upptäckte EpCAM+ CTC hos 60% av 42 HCC-patienter och fann signifikanta korrelationer mellan båda positiviteten frekvens och antalet CTC med TNM-stadium.65 Guo et al fann att en CTC-deriverad PCR-poäng var förhöjd hos 125/171 (73 %) patienter vars AFP-nivå var <20 ng/ml med en känslighet på 72,5 % och en specificitet på 95,0 %, jämfört med 57,0 % och 90,0 % för AFP vid en cut-off 20 ng/ml.66 Kombinationen av AFP och CTC kan förbättra HCC-detektion.45 Man tror att CTC har en fördel jämfört med AFP vid tidig screening av grupper med hög risk för HCC.Markörbaserad kombinerad detektion av CTC kan dock öka andelen positiva resultat.54 En blandning av anti-ASGPR- och CPS1-antikroppar uppnådde en CTC-detektionsgrad på 91 % hos patienter med HCC.63 Zhang et al.använde ett CTC-chip med antikroppar mot ASGPR, P-CK och CPS1, och särskiljde även patienter med HCC från de med benign leversjukdom eller icke-HCC med en hastighet av 100 %.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. frekvens och antal CTCs med TNM-stadiet.65 Guo et al fann att PCR från CTC var förhöjd hos 125/171 (73%) patienter som hade AFP-nivåer <20 ng/ml med en sensitivitet på 72,5% och en specificitet på 95,0 % jämfört med 57,0 % och 90,0 % för AFP vid en gränsvärde på 20 ng/ml.66 Kombinationen av AFP och CTC kan förbättra upptäckten av HCC.45 CTC anses ha en fördel gentemot AFP vid tidig screening grupper.med hög risk för HCC.Markörbaserad kombinerad detektion av CTC kan dock öka andelen positiva resultat.54 En blandning av anti-ASGPR- och CPS1-antikroppar uppnådde en 91 % CTC-detekteringsfrekvens hos patienter med HCC.63 Zhang et al.använde CTC-chips med antikroppar mot ASGPR, P-CK och CPS1 och särskiljde patienter med HCC från benign leversjukdom och icke-HCC med 100 %.64 Wangs studie identifierade 60 % av EpCAM+ CTC hos 42 HCC-patienter och fann en signifikant korrelation mellan incidens och antal CTC i TNM-stadiet. 65 Guo 等人发现，在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中，CTC 衍生的PCR 评分升高，敏感性为72.5%，特异性为95.0%，而AFP 在截止值为20 ng/ml 时的特异性为为57,0% 和90,0%。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 特异性 为 57,0% 和 90,0%。。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/ml. fann att hos 125/171 (73 %) patienter med AFP-nivåer <20 ng/ml, CTC-härledda PCR-värden var förhöjda med en sensitivitet på 72,5 % och en specificitet på 95,0 %, medan AFP var vid cut-off specificitet var 20 ng/ml.ml var 57,0 % och 90,0 %.66 Kombinationen av ORP och CTC förbättrar upptäckten av HCC.45 CTC tros vara överlägsna AFP vid tidig screening av högrisk-HCC-populationer.För CTC-positiva och högrisk-HCC-grupper bör CTC-testning rutinmässigt kombineras med ultraljud och AFP-detektion.CTC anses dock vara viktiga prediktorer för tumörmetastaser och återfall, och detektion av CTC rekommenderas inte oberoende som ett diagnostiskt verktyg.62 Därför kan CTC fungera som en bättre prediktiv biomarkör än andra markörer som för närvarande används. Zhou et al fann att patienter med förhöjt antal EpCAM+ CTC och regulatoriska T-celler visade en högre risk att utveckla HCC-recidiv än de med lågt antal CTCs, med en recidivkvot på 66,7 % mot 10,3 % (P < 0,001).67 En liknande studie rapporterades av Zhong et al.68 Dessutom fann Qi att 101 av 112 patienter (90,81%) med HCC, inklusive de med sjukdom i tidigt skede, var positiva för CTC och att mycket små HCC-knölar upptäcktes efter 3 till 5 månaders uppföljning. Zhou et al fann att patienter med förhöjt antal EpCAM+ CTCs och regulatoriska T-celler visade en högre risk att utveckla HCC-recidiv än de med lågt antal CTCs, med en recidivkvot på 66,7 % mot 10,3 % (P < 0,001).67 A liknande studie rapporterades av Zhong et al.68 Dessutom fann Qi att 101 av 112 patienter (90,81%) med HCC, inklusive de med sjukdom i tidigt skede, var positiva för CTC och att mycket små HCC-knölar upptäcktes efter 3 till 5 månaders uppföljning. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al fann att patienter med förhöjda EpCAM+ CTC och regulatoriska T-celler hade en högre risk för HCC-recidiv än de med låg CTC, med en återfallsfrekvens på 66,7 % mot 10,3 % (P<0,001 )67.En liknande studie utfördes av Zhong et al.68. Dessutom fann Qi att 101 av 112 patienter (90,81%) med HCC, inklusive de med tidig sjukdom, hade CTC och att mycket små HCC-knölar upptäcktes efter 3 till 5 månaders uppföljning. Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 发生 发生 复发 复发 更 ， ， 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 分别 分别 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10 p <0,001)……….. Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.fann att patienter med förhöjda EpCAM+ CTC och regulatoriska T-celler hade en högre risk för HCC-återfall jämfört med patienter med färre CTC, med återfallsfrekvenser på 66,7 % respektive 10,3 % (P < 0,001 ).En liknande studie rapporterades av Zhong et al.68 Dessutom fann Qi att 101 av 112 HCC-patienter (90,81%), inklusive patienter med tidig sjukdom, hade positiva CTC-resultat och hittade mycket små HCC-knölar efter 3 besök.Observation upp till 5 månader.De hittade också CTC hos 12 patienter med kronisk HBV-infektion och fann små HCC-tumörer inom 5 månader hos 2 CTC-positiva patienter.69 Således kan CTC:er användas för att förutsäga HCC, 70 men de kan användas mer rutinmässigt som prediktiva biomarkörer.
Liksom cfDNA frisätts cfRNA i blodomloppet genom olika system.Dessa molekyler i det perifera blodet representerar ursprungets cancervävnad.Jämfört med markörer som detekteras med icke-invasiva metoder är cfRNA mer dynamiskt reglerade, vävnadsspecifika och rikliga i den extracellulära miljön.Betydelsen och det diagnostiska värdet av 71 miRNA (miRNA) i HCC har rapporterats i många studier.miRNA är endogena icke-kodande RNA (ncRNA) som reglerar olika molekylärbiologiska aktiviteter genom att hämma translationen av målbudbärar-RNA (mRNA).miRNA finns i apoptotiska kroppar inkapslade i exosomer, men de kan också stabilt binda till serumproteiner och lipider i perifert blod och kan användas för att utvärdera HCC.mikroRNA är involverade i leverregenerering, lipidmetabolism, apoptos, inflammation och utvecklingen av HCC.72 Onkogena miRNA som miR-21, miR-155 och miR-221 är välkända i HCC.I synnerhet spelar miR-21 en nyckelroll i kollagensyntesen i den extracellulära matrisen och fibros och främjar hepatokarcinogenes genom att aktivera hematopoetiska stamceller.72,73 Tumörsuppressor miRNA i HCC inkluderar miRNA-122, miRNA-29, Let-7-familjen och miRNA-15-familjen.Let-7-familjen består av många tumörsuppressor miRNA som riktar sig mot RAS-familjen.MiR-15-familjen inkluderar miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 och miR-497, som har komplementära sekvenser för vissa mRNA.Dessutom är långa icke-kodande RNA (lncRNA) och cirkulära RNA (cirRNA) också viktiga för tidig screening av HCC.lncRNA representerar den bredaste klassen av ncRNA, inklusive mRNA-liknande ncRNA, och är involverade i patogenesen av många mänskliga sjukdomar.LncRNA spelar en reglerande roll i leverns mikromiljö och kronisk leversjukdom.74 CircRNA är också en klass av ncRNA med flera funktioner i regleringen av genuttryck.Nyligen har circRNA ansetts vara diagnostiska verktyg för HCC.
Cirkulerande fritt RNA har anmärkningsvärd stabilitet, inklusive motstånd mot temperatur, pH och RNas, vilket gör isoleringen av fnRNA från perifert blod mindre tråkig med standardmetoder för RNA-rening.De vanligaste metoderna inkluderar NGS, microarray och RT-qPCR.NGS gör det möjligt att mäta mikroRNA genom hela genomet.Denna metod är dock dyr och analysen är inte standardiserad.Däremot är RT-qPCR billig, förstärker snabbt nukleinsyror och erbjuder många fördelar såsom högre känslighet, högre noggrannhet, bredare dynamiskt område och kräver färre prover.Mikroarrayer är en annan metod som används för miRNA-detektion baserad på känslig och specifik hybridisering av mål-miRNA med komplementära DNA-sonder, 75 men analys av mikroarraydata är tidskrävande.
Cirkulerande miR-122 och Let-7 har rapporterats vara potentiellt användbara för att diagnostisera tidigt stadium av HCC i högriskgrupper, markörer hos patienter med HBV-associerade premaligna knölar och tidigt stadium av HCC.76 Cai et al.fann att medlemmar av Let-7-familjen (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 och miR-199a/b) löper risk för kroniska HCC hos patienter med hepatit.Familjen Let-7 kan fungera som en effektiv ersättningsbiomarkör för att förutsäga utvecklingen av HCC i högriskgrupper associerade med kronisk hepatit C. 77 miR-122 har hög diagnostisk noggrannhet när det gäller att upptäcka tidig HCC hos patienter med levercirros.78 Serum cirkulerande MiR-107 har också utvärderats i de tidiga stadierna av HCC, 79 och har visat god potential i högriskpopulationer.Zhou et al rapporterade att en panel av miRNA (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a och miR-801) kan skilja HCC från kronisk hepatit B (CHB) och cirros sensitiviteten var 79,1 % och 75 % och specificiteten 76,4 % respektive 91,1 %.80 I HBV-relaterat HCC fann vi att miR150-nivåerna var signifikant reducerade jämfört med de hos kroniska HBV-patienter utan HCC (sensitivitet 79,1 %, specificitet 76,5 %).-224 var förhöjd i HCC jämfört med friska kontroller, och undergruppsanalyser visade högre nivåer hos patienter med HCC associerat med HBV.hepatit B-associerad cirrhosis och HCC-patienter identifierade en siRNA-klassificerare innehållande sju differentiellt uttryckta siRNA som kan detektera HCC i olika kontroller;AUC-intervallet vid tidig screening är bättre än AFP-frivilliga.De fann att fyra miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p och miR-365a-3p) kunde skilja patienter med HCC från patienter utan HCC.Fem överuttryckande miRNA (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p och miR-148a-3p) anses vara potentiella HBV-infektioner i HCC, cirros och CHB-biomarkörer, särskilt miR-34a-5p kan vara biomarkörer för levercirros,85 och kan vara potentiella biomarkörer för tidig screening av HCC i högriskpopulationer.Det mest studerade lncRNA:t i HCC är starkt aktiverat vid levercancer (HULC).Andra studier har visat att HULC som cirkulerar i HCC-patienter kan användas som en diagnostisk markör eftersom detta lncRNA är starkt uppreglerat hos HCC-patienter jämfört med friska individer.71,86 Bland andra lnRNA anses LINC00152 vara det bästa diagnostiska lncRNA:t på grund av dess höga AUC, sensitivitet och specificitet.86 I en studie ökade perifert bloduttryck av LINC00152 gradvis från normala friska kontroller till patienter med CHB och cirros, och var slutligen högst i HCC.Studier av uttrycket av circSMARCA5 i plasma hos patienter med HCC har visat en progressiv minskning av uttrycket i HCC, allt från hepatit till cirros och precancerösa lesioner.87 Analys av ROC-kurvor bekräftade potentialen hos dessa circRNA för att skilja patienter med hepatit eller levercirros från de med HCC, särskilt de med AFP-nivåer under 200 ng/ml.Dessutom analyserade Zhu 13 617 cykliska RNA i plasmaprover från HBV-associerade HCC-patienter och bekräftade att 6 cykliska RNA uttrycktes olika i HCC och HBV-associerad cirros, vilket tyder på att cRNA kan vara fördelaktigt.markörer för tidig screening av högriskgrupper såsom de som är associerade med leversjukdom, sklerospatienter.88
Exosomer är membranvesiklar 40–160 nm i diameter;flera intracellulära vesiklar smälter samman med cellmembranet och frisätts i den extracellulära matrisen.De innehåller många aktiva komponenter, inklusive lipider, proteiner, RNA och DNA, och spelar en nyckelroll i kommunikationen mellan celler, både HCC- och icke-HCC-celler.89,90 Exosomer reglerar utvecklingen av HCC genom att aktivera hepatocytfibroblaster och stellatceller, immunceller, normala hepatocyter och HCC-celler.91 I tumörmikromiljön producerar tumörceller ett stort antal exosomer som transporteras från cancerceller till omogna celler, som i sin tur är involverade i onkogenes, nedbrytning och cellulär signalering.92 Studier har visat att exosomer kan överföra onkogener till normala celler under patologiska processer, vilket kan vara en av mekanismerna för tumörinvasion och metastasering.93 Exosomers roll i cancerprogression kan vara dynamisk och specifik för cancertyp, 89 Exosomer kan internaliseras av intilliggande eller avlägsna celler för att reglera multipla målgener i mottagarceller som kan vara involverade i intercellulära kommunikationjoner och cellulära mikromiljöinteraktioner, de kan mediera cellulär signalering och metabolism.94 Karakteristika och dynamiska förändringar av exosomlastmolekyler återspeglar direkt egenskaperna och dynamiska förändringarna hos föräldrarnas tumörceller,95 vilket också är grunden för användningen av exosomer vid diagnos och prognos av cancer, samt för att förutsäga individuella svar på cancerterapi. ..96
Traditionella laboratoriemetoder för att isolera och analysera exosomer är komplexa, flerstegs- och tidskrävande, inklusive ultracentrifugering, filtrering, storleksuteslutningskromatografi, immunaffinitetsrening, Western blotting, enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA), PCR och flödesanalys.miniatyriserade system och lab-on-a-chip-plattformar som använder mikro/nanoteknik utvecklas brett för snabb och bekväm in situ isolering av exosomer.Nanopartikelspårningsanalys (NTA) är en mycket använd metod för att karakterisera storleken och koncentrationen av exosomer, inklusive metoder som magnetiska nanopartiklar och polyhydroxialkanoater.Mikrofluidiska och elektrokemiska metoder kan också snabbt upptäcka exosomer i hög avkastning.
Exosomala proteiner är viktiga markörer för diagnos av HCC.I Arbelaiz-studien var nivån av 98 RasGAP SH3-bindande protein (G3BP) och polymer immunglobulinreceptor (PIGR) signifikant förhöjd i HCC-härledda exosomer, och den förmodade kombinerade effekten av de två proteinerna var överlägsen den för AFP.Järnöverbelastning är en viktig faktor som bidrar till utvecklingen av HCC.Tseng rapporterade att hepcidin kan spela en nyckelroll i resistens mot HCC.99 exosomer härledda från sera från HCC-patienter hade ett signifikant högre antal kopior av hepcidin-mRNA-varianter än deras friska motsvarigheter, vilket tyder på att hepcidin kan vara en ny diagnostisk biomarkör för HCC.14-3-3ζ-proteinet i exosomer som produceras av 100 HCC kan minska T-cellsaktivering, proliferation och differentiering och kan inducera T-cellstransformation till regulatoriska T-celler, vilket resulterar i T-cellsutarmning.101 Detta stöds av flera studier som undersöker tumörundandragande från immunövervakning, 102 vilket kan bidra till HCC-tumörbildning.
Förutom närvaron av ecRNA i plasma eller serum, kan RNA-berikade exosomer användas för icke-invasiv realtidsstaging i tidig tumörscreening och för att bestämma tumörutveckling och svar på terapi.Nivån av exosomal miRNA-21 i blodserumet i HCC-gruppen var 2,21 gånger högre än i CHB-gruppen, och i HCC-gruppen var den 5,57 gånger högre än i den friska befolkningen.I Wang-studien ökade exosomer signifikant HCC jämfört med cirrospatienter med AUC-värden på 0,83 (95 % CI 0,74–0,93) och 0,94 (95 % CI 0,88–1,00).104 De erhållna uppgifterna klargjorde inblandningen av specifika exosomala lastmolekyler i regleringen av onkogenes och HCC-progression.105 Serumuttryck av miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 och miR-26a är konsekvent.och metastaser, och miR21-nivåerna var mycket högre hos HCC-patienter än hos friska kontroller och även hos CHB-patienter.102 LncRNA hade potentiellt diagnostiskt värde i HCC.Studier har visat att exosomer som härrör från sera från HCC-patienter har signifikant högre nivåer av LINC00161, LINC000635 och lncRNA aktiverat genom att transformera tillväxtfaktor-β än hos patienter utan HCC, och dessa lncRNA är starkt associerade med TNM-stadium och tumörvolym.110 Conigliaro et al.CD90+ exosomer visade sig uttrycka höga nivåer av lncRNAH19, vilket signifikant ökade frisättningen av vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF) och VEGF-R1-receptorproduktionen, vilket stimulerade angiogenes.93 CircRNA är en annan typ av exosomal ncRNA - uttryckt på lägre men stabila nivåer över arter, circRNA visar också specificitet för celltyp, vävnadstyp, utvecklingsstadium och regulatorisk aktivitet.111 circRNAs är diagnostiska biomarkörer för tidig och minimalt invasiv cancer.112 Nyligen genomförda kliniska prövningar har visat att specificiteten hos individuella miRNA för att förutsäga HCC inte är idealisk.Därför kan komplex detektion med hjälp av flera analyser (t.ex. miR-122 och miR-48a i kombination med AFP) förbättra identifieringen av tidig HCC och differentieringen av HCC från cirros.100
Patienter med CHB och levercirros är den vanligaste högriskgruppen för att utveckla HCC.För högriskgrupper bör en kostnadseffektiv övervakningsstrategi baserad på HCC-risk utvecklas, när ett ihållande virologiskt svar har uppnåtts, och tidig screening är nyckeln till att förbättra diagnosen och behandlingen av HCC med ett högt kostnadseffektivitetsförhållande2 ..Tidiga screeningmetoder för cancer har många begränsningar: effektiva tidiga screeningmetoder har inte utvecklats för de flesta typer av cancer, och följsamheten är vanligtvis låg.Jämfört med traditionella tidiga screeningmetoder har flytande biopsiteknologi uppenbara fördelar: enkel provtagning, panracdetektion, god provreproducerbarhet och effektivt svar på tumörheterogenitet.Med tanke på kostnadseffektiviteten hos metoderna förknippade med flytande biopsi, har deras användning vid HCC-screening inte rutinmässigt testats.Trots framsteg inom noggrann detektion på molekylär nivå är vätskebiopsi kostsamt att upptäcka HCC hos målpatienter, vilket begränsar dess utbredda användning jämfört med specifika avbildningsförfaranden såsom ultraljud och magnetisk resonanstomografi.113 114 En tidigare studie visade dock att flytande biopsi visade en betydande fördel i termer av kvalitetsjusterade levnadsår (QALYs).115 Fördelarna med flytande biopsi vid tidigt karcinom i magen och nasofarynx har också visats.116 117 Den nuvarande uppfattningen är att flytande biopsi kan komplettera serumbiomarkörer och radiologisk screening vid upptäckt och diagnos av tumörer.117 118
Enligt aktuell litteratur har vätskebiopsiteknologi visat signifikant högre sensitivitet och specificitet vid tidig screening av högriskgrupper för levercancer.Oavsett vilken typ av vätskebiopsi kan den skilja HCC från högriskindivider utan HCC, vilket tyder på vikten av tidig screening eftersom skillnader mellan högrisk- och friska individer är uppenbara.ctDNA har en kort halveringstid och kan användas för att detektera HCC, så alla förändringar i tumörhärlett cDNA kan ge konkreta bevis i realtid på tumörprogression, särskilt för små tumörer.En hög nivå av ctDNA indikerar utveckling och spridning av cancer och är en tidig indikator på progression och återfall.Utifrån resultaten av ctDNA kan patienter dessutom få individualiserad behandling och uppföljning.119 Specifika metyleringsställen kan vara en bättre markör än AFP för tidig identifiering av HCC och cirrotiska knölar.I resekterbara fall av HCC, är höga nivåer av cDNA tecken på mikrovaskulär invasion och postoperativt återfall och metastaser.Förändringar i antal kopior är förknippade med överlevnaden av patienter med HCC.Det kan antas att cDNA-utvärdering kan vara involverad i den övergripande behandlingen av HCC, och cDNA kan tjäna som en effektiv indikator på terapeutisk modulering.Markörer baserade på specifika genetiska mutationer i ctDNA har antagits av kliniska riktlinjer för att förutsäga effekt och övervaka läkemedelsresistens.ctDNA-testning kan vara det mest användbara verktyget för flytande biopsi för tidig screening.CTC spelar också en nyckelroll i den tidiga screeningen av högrisk-HCC-grupper.Olika markörer för HCC-associerade CTC är av särskild betydelse vid uppkomst, utveckling och återfall av HCC.Som membranvesiklar är exosomer involverade i intercellulär kommunikation, särskilt i HCC-celler.Cirkulerande mikroRNA är stabila i blodet och kan därför vara mer användbara för tidig screening av HCC.Gradvis upptäcktes exosomala proteiner och RNA-rika exosomer, och deras prediktiva effekt för HCC bekräftades.Intressant nog kan olika etiologier för HCC också vara associerade med olika mutationer, så vi kan välja olika biomarkörer för tidig screening baserat på olika etiologier för HCC.120
Men nuvarande vätskebiopsitekniker är tveksamma när det gäller stabilitet och kan inte självständigt utföra tidig screening eller övervakning av HCC, men kan fortfarande komplettera individuell screening och diagnos.121 Som en form av flytande biopsi har detektering och avbildning av ctDNA, CTC, cfRNA och exosomassocierad AFP eller PIVKA-II lovande tillämpningar vid tidig diagnos och prognos av HCC.Den exakta mekanismen för ctDNA-frisättning i blodet återstår dock att klarläggas.Att avslöja de grundläggande biologiska egenskaperna hos ctDNA kan underlätta dess användning som markör.Den lilla mängden ctDNA i cirkulationen och stränga provhanteringskrav är utmaningar för den kliniska implementeringen av cDNA-detektion i HCC.Dessutom har genetiska mutationer inga specifika egenskaper som tillåter exakt identifiering av cancerframkallande ämnen.Eftersom flera genetiska och somatiska varianter också finns i normala vävnader, kan genetiska mutationer som identifieras genom vätskebiopsi vara av begränsad användbarhet vid tidig screening för HCC.122 Begränsningarna för väldefinierade användbara genmål och biomarkörer som hjälper till att skilja cDNA från icke-tumör-DNA är de viktigaste frågorna vid användningen av cDNA.brist på användbarhet av känsliga och specifika markörer för detektion av CTC.Endast viabla celler med metastatisk potential hittades, och den optimala kombinationen av CSC-berikade markörer var oklar.Isolering av CTC för odling och utvärdering av deras mutationsprofiler är också en utmanande uppgift.På grund av problem med identifiering, isolering och rening av exosomer är den specifika molekylära mekanismen fortfarande oklar, och tidigare studier om mekanismen för exosomer och HCC har inte varit på djupet, och hur miRNA, lncRNA och proteiner sorteras i exosomer , och det är inte klart om exosomupptag är en process av specifik typ.Användningen av exosomer för diagnos och behandling av HCC är fortfarande i det prekliniska skedet.Bristen på standardisering av vätskebiopsiprocedurer, såsom typen av rör som används för att samla in blod, blodvolym, provlagring och detektion, isolering och anrikning, kan utesluta deras användning i rutinmässig klinisk praxis på grund av skillnader i praxis mellan vårdcentraler.Effekten av flytande biopsi vid tidig screening, diagnos, effektutvärdering och förutsägelse av HCC återstår att utforska, särskilt för högriskgrupper.Tekniken för flytande biopsi har stor potential och förväntas användas i stor utsträckning i den kliniska praktiken av levercancer inom en snar framtid.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Global cancerstatistik 2020: GLOBOCAN uppskattar incidens och dödlighet från 36 typer av cancer i 185 länder.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Högkvarter för National Health Commission.Kriterier för diagnos och behandling av primär levercancer (2022 års upplaga) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Riktlinjer för diagnos och behandling av hepatocellulärt karcinom (2019 års upplaga).Lever cancer.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Riktlinjer för klinisk praxis för hepatocellulärt karcinom: Japanese Society for Liver Diseases, 2017 (JSH-HCC 4th guidelines), 2019 uppdatering.Leversjukdomsreservoar.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Vätskebiopsi vid kronisk leversjukdom.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Flytande bröstcancerbiopsi: en fokuserad recension.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Övervakning för hepatocellulärt karcinom: nuvarande bästa praxis och framtida riktningar.Gastroenterologi.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Kliniska riktlinjer EASL-EORTC: behandling av hepatocellulärt karcinom.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Kombinerad analys av AFP och HCCR-1 som användbara serologiska markörer i små hepatocellulära karcinom: en prospektiv kohortstudie.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Differentiellt uttryck av plasma mikroRNA-125b i hepatit B-virus-associerad leversjukdom och diagnostisk potential för hepatit B-virus-inducerat hepatocellulärt karcinom.Reservoar för leversjukdom.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologi och betydelse av alfa-fetoprotein i hepatocellulärt karcinom.Lever int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Kliniska riktlinjer för behandling av hepatocellulärt karcinom i Asien-Stillahavsområdet: 2017 uppdatering.Internationella organisationen för leversjukdomar.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Diagnostiskt värde av serum PIVKA-II ensamt eller i kombination med AFP hos kinesiska patienter med hepatocellulärt karcinom.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Icke-småcellig lungcancer biopsi av icke-plasma humoral vätska: närmare tumören!cell.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Flytande biopsi: nuvarande status och framtidsutsikter.Behandling Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Vätskebaserad cancerbiopsi: ett multimodalt diagnostiskt verktyg i klinisk onkologi.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleinsyror i human plasma.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Avancerad detektion av cirkulerande tumör-DNA genom fragmentstorleksanalys.Vetenskap översätter medicin.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Cirkulerande tumör-DNA-fragmentlängd.PLOS gener.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Cirkulerande tumör-DNA: en lovande biomarkör i vätskebaserad cancerbiopsi.måltumör.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detektion av cirkulerande tumör-DNA i tidiga och sena stadier av mänskliga maligniteter.Vetenskap översätter medicin.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Flytande biopsi för mutationsprediktiv analys av solid cancer: en patologs perspektiv.J Bioteknologi.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Tidig tumördetektering genom DNA-screening i cirkulerande plasma: hype eller hopp?belgisk klinisk lag.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Effekt av hepatitvirus och åldrande på DNA-metylering vid human hepatokarcinogenes.Histopatologi.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647